Koyun Karaciğerinden Alkol Dehidrogenaz: Saflaştırma, Karakterizasyon, ve Bazı Antibiyotiklerin Etkileri

Abstract

Alkol dehidrogenaz (ADH), her bir alt biriminin bir Zn2 metal içeren katalitik alana ve bir kofaktör bağlama alanına sahip olduğu dimerik bir enzimdir. Bu enzim, alkolü, aldehide dönüştürür. Bu makale koyun karaciğerinden alkol dehidrogenazın saflaştırılması, karakterizasyonu enzimin aktivitesi üzerine bazı antibiyotiklerin in vitro ekilerine odaklanmaktadır. ADH, DEAE-Sephadex A-50 iyon değişim kromatografisi ve Sephadex G-100 jel filtrasyon kromatografisi vasıtasıyla koyun karaciğerinden 0.5 U mg-1 protein spesifik aktivite ve yaklaşık olarak 52.03-kat saflaştırıldı. Enzimin alt birim ve doğal hallerinin molekül kütleleri jel filtrasyon kromatografisi ve SDS-PAGE ile sırasıyla 38.16 kDa ve 80.49 kDa olarak belirlendi. ADH'ın optimum iyonik şiddeti, sıcaklığı ve pH'sı sırasıyla 400 mM, 40C ve 10.5 idi. Antibiyotiklerin inhibitor etkileri çeşitli konsantrasyonlarda denendi. Kanamisin sülfat, amikasin sülfat, gentamisin, linkomisin ve klindamisin için IC değerleri sırasıyla, 43.31, 36.47, 20.38, 18.73 ve 1.31 mM olarak bulundu

Alcohol dehydrogenase (ADH) is a dimeric enzyme in which each subunit of the enzyme has a Zn2metal-containing catalytic domain and a cofactor-binding domain. This enzyme converts the alcohol to aldehyde. The present article focuses on the purification, characterization and in vitro effects of some antibiotics on alcohol dehydrogenase from sheep liver. ADH was purified with specific activity of 0.5 U/mg proteins and approximately 52.03-fold from sheep liver by DEAE-Sephadex A-50 ion exchange chromatography and gel filtration on Sephadex G-100. The subunit and the natural molecular weights of the enzyme were determined by gel filtration and SDSPAGE 38.16 kDa and 80.49 kDa, respectively. The optimum ionic strenght, temperature and pH of ADH were found 400 mM, 40 C and 10.5, respectively. The inhibitory effects of the antibiotics were tested at various concentrations. IC values for kanamycin sulfate, amikacin sulfate, gentamicin, lincomycin, and clindamycin were found to be 43.31, 36.47, 20.38, 18.73 and 1.31 mM, respectively