Sülfanilamid Bağlanmış Manyetik Nanopartiküllerle (Fe 3 O 4 @SiO 2 -PA-SA) Karbonik Anhidraz Enziminin Saflaştırması
Küçük Resim Yok
Tarih
2018
Yazarlar
Dergi Başlığı
Dergi ISSN
Cilt Başlığı
Yayıncı
Erişim Hakkı
info:eu-repo/semantics/openAccess
Özet
Enzimler, endüstriyel süreçlerde ve bilimsel çalışmalarda oldukça yaygın olarak kullanılmaktadır. Bu sebeple enzimlerin hızlı ve ucuz bir yolla yüksek saflıkta saflaştırılması, ekonomik bir önem arz etmektedir. Bu projede amaç, karbonik anhidraz (CA) enzimini kısa sürede yüksek verimle saflaştırmak için ucuz, tekrar kullanılabilir ve manyetik temelli yeni bir materyal geliştirmektir. Projenin birinci bölümünde ilk olarak Fe3O4 MNP sentezlenmiştir. MNP?nin kararlılığını sağlamak için ikinci basamakta tetraetilortosilikat (TEOS) kullanılarak MNP?ler silika ile kaplanmış ve Fe3O4@SiO2 elde edilmiştir. Üçüncü basamakta Fe3O4@SiO2 yüzeyine APTES ((3-Aminopropil) trietoksisilan) ile -NH2 grubu ilave edilerek Fe3O4@SiO2-NH2 üretilmiştir. Dördüncü basamakta ise Fe3O4@SiO2-NH2 yüzeyinde bulunan -NH2 ile Phloretik asitin (PA, 3-(4-hidroksifenil) propiyonik asit) -COOH grubu, EDC (N-(3- Dimetilaminopropil)-N?-etilcarbodiimid hidroklorid) ve NHS (N-hidroksi süksinimid) aktivatörlüğünde, kovalent olarak bağlanmış ve Fe3O4@SiO2-PA elde edilmiştir. Son olarak karbonik anhidraz enziminin ilgisinin bulunduğu sülfonamidin (SA) diazonyum tuzu, Fe3O4@SiO2-PA?de bulunan Phloretik asitin aromatik halkasına bağlanarak Fe3O4@SiO2- PA-SA sentezlenmiştir. Nihai partikül (Fe3O4@SiO2-PA-SA) SEM, TEM, XRD ve FT-IR ile karakterize edilmiştir. TEM analiz sonuçları, hekzagonal şekle sahip monodispers ve ortalama 10 nm boyutlarında Fe3O4 MNP?ler üretildiğini göstermektedir. Silika kaplama ve APTES modifikasyonu yapılan nanopartiküllere ait TEM görüntüleri; Fe3O4@SiO2-NH2 MNP?lerin multi-çekirdek içerdiğini, SEM görüntüleri ise MNP?lerin 100 nm?den küçük ve küresel morfolojiye sahip olduğunu göstermektedir. Projenin ikinci bölümünde Fe3O4@SiO2-PA-SA kullanılarak hemolizattan karbonik anhidraz (CA) enzimi saflaştırılmıştır. Fe3O4@SiO2-PA-SA partikülleri hemolizat ile karıştırılıp CA?nın sülfanilamite bağlanması sağlanmıştır. Daha sonra bir mıknatıs ile Fe3O4@SiO2-PA-SA
Açıklama
1.10.2018
Anahtar Kelimeler
Karbonik Anhidraz, Manyetik Nanopartikül, Saflaştırma, Nanobilim ve Nanoteknoloji, Kimya, Uygulamalı
